PEMBUATAN SERUM, PENCUCIAN SEL DAN PEMBUATAN SUSPENSI SEL

Judul Praktikum:     PEMBUATAN SERUM, PENCUCIAN SEL DAN PEMBUATAN SUSPENSI SEL

Tujuan Praktikum:

• Untuk memisahkan serum dari contoh darah
• Untuk mendapatkan reaksi yang maksimal dangan cara pencucian sel
• Untuk membuat suspensi darah

Prinsip                     :

1.      Memisahkan serum dan contoh darah

Darah tanpa antikoagulan dibiarkan 15-20 menit supaya membeku sempurna kemudian serum diambil dan dicentrifuge, ambil cairan jernih sebagai serumnya

2.      Pencucian sel

Sel darah dicuci dengan saline untuk menghilangkan sisa-sisa globulin yang melekat pada sel

3.      Suspensi sel

Penambahan larutan saline dengan konsentratsi tertentu pada sle darah sesuai suspensi yang dibuat

Alat & Bahan

1.      Alat              :

• ·      Jarum suntik/ spuit
• ·      Centrifuge
• ·      Pipet pasteur
• ·      Tabung centrifuge
• ·      Kapas alkohol dan plester
• ·      Tourniquet
• ·      Label
• ·      Tabung
• ·      Rak tabung

2.      Bahan          :

• ·         Darah tanpa antikoagulan
• ·         Larutan NaCl 0,9%
• ·         Larutan asam sulfosalisilat 20%
• ·         Aquadest

Prosedur kerja

A.    Pengambilan darah vena

B.     Memisahkan serum dari contoh darah

1. Darah yang baru diambil tanpa antikoagulan, dibiarkan 15-20 menit supaya membeku sempurna dan ditunggu sampai cairan serumnya keluar
2. Setelah serumnya keluar, dengan hati-hati menggunakan pipet pasteur, serum diambil bersama sel-selnya yang bebas dan ditampung didalam sebuah tabung
3. Ambillah serum ini sebanyak yang didapatkan, kemudian darah tadi disentrifuge dengan kecepatan 1500-3000 rpm selama ±3 menit maka akan didapatkan serum yang jernih dibagian atas dan sedimen sel di bagian bawah
4. Kemudian dengan pipet yang sudah dicuci (cuci dengan air minimal 3 kali) lalu dibilas dengan NaCl 0,9% sebanyak 3 kali serum dipindahkan ke sebuah tabung lain yang bersih
5. Selanjutnya sel dicuci untuk membuat suspensi sel

 

C.    Cara Pencucian sel

1. Satu bagian Packed Cells ditambahkan minimal 10 bagian saline dicampur dalam tabung sentrifuge
2. Saline ditambahkan dalam tabung sampai memenuhi tabung (1 cm dari mulut tabung)
3. Campur isi tabung (sel + saline) dengan pipet pasteur hingga sel tersuspensi dengan rata atau homogen
4. Lalu disentrifuge dengan kecepatan 1500-2000 rpm selama ±3 menit atau selama 1,5 menit pada 3000 rpm
5.  Dibuang supernatan salinenya dengan menggunakan pipet pasteur
6.  Dilakukan pencucian sebanyak 3 kali
7. Untuk meyakinkan bahwa pencucian sudah bersih, diuji dengan asam sulfosalisilat 20% yang diteteskan pada supernatannya. Jika tidak ada kekeruhan berarti sudah bersih, tetapi jika masih keruh dilakukan lagi pencucian.

 

D.    Pembuatan suspensi sel

Endapan padat dari sel yang sudah dicuci disebut Washed Packed Cells. Endapan ini kemudian dibuat suspensi sebagai berikut:

1. Suspensi 5%      = 1 bagian WPC + 19 bagian saline
2. Suspensi 10%    = 1 bagian WPC + 9 bagian saline
3. Suspensi 25%    = 1 bagian WPC + 3 bagian saline